DiI現(xiàn)貨供應(yīng), 細(xì)胞膜橙紅色熒光探針現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品描述

DiI是一種親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)，進(jìn)入細(xì)胞膜后，DiI在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散，*濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。DiI在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)，中等強(qiáng)度的光量子和很短的激發(fā)態(tài)壽命?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的TRITC濾光片檢測。

DiI通常不會明顯影響細(xì)胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了zui簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品4ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事項

1) 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2) 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

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使用方法

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】工作液zui終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始*濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色

（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×10⁶/mL。

（2）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（3）孵育結(jié)束，按1000～1500 rpm離心5min。

（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。

3. 貼壁細(xì)胞的染色

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

（4）37 ℃孵育細(xì)胞 2～20min，不同的細(xì)胞*培養(yǎng)時間不同。可以20min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10min，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 顯微鏡檢測

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀檢測

經(jīng)DiO，DiI，DiD和DiR染色的細(xì)胞可分別用流式細(xì)胞儀的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3或FL4通道檢測。

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